测定步骤：

一.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样，不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

二.温浴

1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。

三.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

四.读板

1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。