1）加入1ml Trizol试剂，混匀，冰上孵育10min。

2）4℃，12000rpm离心10min，小心转移上清液到不含颗粒的新EP管中。

3）加入200ul氯仿，剧烈振荡15秒，室温孵育5min。

4）4℃，12000rpm离心15min。混合液分三层，包括最下面的C6H5OH - 氯仿有机相，中间相和上层水相。小心转移上层水相到新的EP管（大约60％体积的Trizol），不要吸取中间相，可留下少量上层液体！（Note：质量比数量更重要！）

5）加入等体积的异丙醇，轻轻地颠倒混匀约10次，室温放置10min。

6）4℃，12000rpm离心10min。弃上清，1ml 75％乙醇洗涤RNA沉淀两次。

7）4℃，12000rpm离心5min，弃上清，室温下风干5-10min（不要太干，过度干燥会导致RNA难溶解！）。将RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。

8）立即进行反转录反应，或先-80℃长期保存。