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elisa检测试剂盒原理的程序

时间:2020-10-14      阅读:262

elisa检测试剂盒原理:

    采用竞争法测定金黄地鼠氧化elisa检测试剂盒水平。用金黄地鼠氧化抗原包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入标本及标准品,并加入HRP标记的OXLDL抗体,标本及标准品中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,颜色越浅。颜色的深浅和样品中的OXLDL含量呈负相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值),根据标准曲线,计算测试样品中OXLDL浓度。

elisa检测试剂盒操作程序:

1. 弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

2. 每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。。

3. 取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

4.测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

5.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据elisa检测试剂盒样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

elisa检测试剂盒试剂盒性能:

1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

2. 灵敏度:zui低检测浓度小于(参考说明书)

3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

6. 有效期:6个月。 

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