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elisa检测试剂盒操作步骤和注意事项

时间:2020-08-03      阅读:830

elisa检测试剂盒操作步骤:

实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。

1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul,余孔分别加标准品或待测样品100ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100ul(取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。

3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干。 

4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100ul,37℃,60分钟。

5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干。

6.依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光显色(30分钟以内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.  依序每孔加终止溶液50ul,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

 

elisa检测试剂盒注意事项:

1.  洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。

2.  一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

3.  请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。

4.  如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。

5.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。

6.底物请避光保存。

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