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中文名称:GTPase Cdc42抑制剂(IN)
英文名称:IN
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
货号:FS-X11081
产品介绍:
IN是一个选择性的GTPase Cdc42抑制剂,IC50值是2uM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:425399-05-9 纯度:98.64% 分子量:306.4 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
转化生长因子β4抗体TGF β4 Lefty
磷suan化微管相关蛋白抗体 phospho-Tau protein(Ser202)
转录因子12抗体 TCF12
跨膜转运蛋白21抗体 TMP21
睾特异蛋白抗体 TSBP
THAP2蛋白抗体 THAP2
瞬时受体电位离子通道蛋白5抗体(M亚家族) TRPM5
瞬时受体电位离子通道蛋白4抗体(M亚家族) TRPM4
转运蛋白1抗体 Transportin 1
核凋亡因子THAP1抗体 THAP1
精形成相关凋亡蛋白2抗体 TSARG2
细胞毒颗粒相关蛋白TIA-1抗体 TIA1
GTPase Cdc42抑制剂(IN)嗜麦芽寡养单胞 3-Acetoxy-4-cadinen-8-one
黄硬皮马勃 3-Acetoxy-24-hydroxydammara-20,2
灵芝 30-Hydroxylup-20(29)-en-3-one
拟威克酵母属 3,4-Dihydro-3,4-dihydroxynaphtha
谢瓦曲霉 3',4',7-Trimethoxyflavan
尖孢镰孢 3,22-Dihydroxyolean-12-en-29-oic
传染性喉气管炎病 3-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)pro
大肠埃希 2β-Hydroxykolavelool
PET28a-EGFP 荧光蛋白大肠杆(绿色) 2'-O-Methylbroussonin C
无 2-Epitormentic acid
*蛹虫草 29-Norcycloart-23-ene-3,25-diol
绿色木霉 28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-o
赭曲霉 25-Hydroxycycloart-23-en-3-one
清酒假丝酵母 22-Dehydroclerosteryl acetate
枯草芽孢杆 21αH-24-Norhopa-4(23),22(29)-die