试剂配制

① 缓冲液：将缓冲液试剂袋中的试剂倒出，溶于500ml 蒸馏水中，溶解、混匀即可。

② 底物：按需添加的底物量，向标有“底物”的试剂瓶中加入蒸馏水溶解、混匀即可。0~5oC环境下冷藏保存。

底物添加量为20ul时，应往标注为底物的瓶中加入2.7ml蒸馏水；

底物添加量为100ul时，应往标注为底物的瓶中加入13ml蒸馏水。

③ 显色剂：无需配制放入冰箱冷藏（0~5℃），切勿冷冻结冰。

④ 酶试剂：酶试剂已配成溶液可直接使用。平常要在0~5oC环境条件下冷藏保存，切勿冷冻至结冰！！！

操作步骤

1.样品前处理：

(1 (1) ①植株：称取2g样品（叶菜剪成宽度为1厘米的菜样，块根菜取1厘米左右的表皮样品）放入三角瓶中，加入10ml缓冲液后，振荡提取2分钟；

②茶叶：称取0.5g茶叶样品，加入5ml丙酮，振荡提取5分钟；取0.2ml上述丙酮溶液，40~50℃水浴蒸干；加入2.5ml缓冲液，振荡2分钟；（自备丙酮）

(2) 若浸提液清澈无色或颜色较浅，取上清液待测；

若浸提液混浊，离心，取上清液待测；

若浸提液色素干扰严重，可用活性炭脱色，具体方法如下：

将浸提液转移至另一个三角瓶中，加入0.1~0.5g活性碳(根据颜色深浅调整)，水浴70℃加热5分钟，取出趁热过滤，滤液待测。

[备注]：葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）浸提，避免次生物物质干扰。

2.检测样品的制备：

(1) 空白对照液:

①取酶100ul，缓冲液2.5ml，加入反应瓶中，混匀静置10分钟后，再加入显色剂100ul。

②加入底物20ul（或100ul）；

③摇匀后立即测试。

(2) 检测样品液:

①取酶100ul，待测样品液2.5ml，加入反应瓶中，混匀静置10分钟后，再加入显色剂100ul。

②加入底物20ul（或100ul）；

③摇匀后立即测试。

3 检测样品测试：

(1) 空白对照测量：

① 取2.5ml对照样品于比色皿中；

② 将比色皿放入的通道中；

③ 按“对照”键，屏幕下方显示测量时间；

④ 检测结束后，仪器自动显示对照样品的测试结果△Ao。

[备注]：a 当空白对照值在0.15-0.3之间时，可继续做实验；

   b 当空白对照值在＜0.15时，需重做空白对照，若重复多次的空白对照值＜0.15时，必须更换酶试剂。

c 当空白对照值在＞0.3时,要调试减少仪器的测量时间，重新做空白对照。

(2) 样品测量：

① 取2.5ml待测样品于比色皿中；

② 将比色皿放入的通道中；

③ 按“样品”键，屏幕下方显示测量时间；

④ 检测结束后，仪器自动显示通道检测样品的测试结果△Ai。

判断标准

(1) 样品的抑制率在40~50%之间为可疑农残超标样品；

(2) 抑制率＞50%为农残超标样品，表明被测样品的农药残留毒性可能超过安全的界定标准，建议用气相色谱等仪器分析法作进一步确认。

注意事项

   ①  加入底物后，应迅速混匀，立即测试。

   ②  测试前根据需添加底物的量对底物进行稀释：

   ③  所用的检测液对皮肤均具有不同程度的伤害，使用时请做好防护。不慎沾到皮肤应立即擦干并用大量水冲洗。

检测试剂请务必在2~4℃冰箱保存。