产品名称：Hoechst 33258染色液（0.1mM）

规格：10 mL/50 mL

货号：BJP1283

分类：荧光核酸试剂
产品仅用于科研储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光，快递免费送货上门。

染料法

探针法　

可进行相对，定量表达分析，定性分析，SNP检测等

实验报告

·电泳图   ·标准曲线 

·溶解曲线 ·扩增曲线

·完整的实验过程、试剂、仪器及分析报告

储存条件：

14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

探针法：

aqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它的荧光与目的序列的扩增相关。它与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。荧光基团连接在探针的5’ 末端，而淬灭剂则在3’ 末端。当完整的探针与目标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3’ 端的淬灭剂接近而被淬灭。但在进行延伸反应时，聚合酶的5’ 外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。相对于染料法,Taqman探针法具有更高的特异性和准确性。

​

检测步骤：

一、 试剂的准备

从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。

设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量

荧光PCR反应液 14µL N×14µL

酶混合物 1 µL N×1 µL

总量 15 µL N×15µL

（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。

7.2 qPCR反应条件

将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。

推荐循环条件:

1循环 50℃ for 2 min

预变性 1循环 95℃ for 10 min

PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
操作程序：

由您提供该实验中目的基因的相关资料（如：基因名称、序列等信息），我们共同探讨服务的可能性和技术路线；

商定服务收费、付款方式、服务期限等，并签定技术服务合同。

有您提供实验所需的足够量的实验样本（100mg组织或107个细胞），本公司不接受您提供的RNA样本

PCR所需引物/探针（如果用探针法），可以由您自己提供，也可以委托本公司设计合成（费用另计）。如果由您自己提供，必须是PAGE纯化的高质量的干粉，本公司不接受已溶解的引物/探针。

我们进行RNA抽提、RNA定量、反转录、Real-time PCR扩增、数据分析。

产品仅用于科研提供实验报告，包括实验过程、所用仪器试剂、扩增曲线、标准曲线和相关分析数据等。

客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

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Hoechst 33258染色液（0.1mM）霉味假单胞菌种属: Pseudomonas│mucidolens冻干物安全等级: 1模式菌株: yes应用领域: 模式菌株培养基: 0002生长条件: 30℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Aspergillus│sp.分离基物: 豆腐乳冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 30℃存储条件: -80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

Alternaria│sp.分离基物: 植物冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0014生长条件: 18-26℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Escherichia│coli冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: K-12, F+, 杂交用培养基: 0002生长条件: 30℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Chaetomium│globosum Kunze分离基物: 梨斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 不详！为该菌的进一步利用提供材培养基: 14生长条件: 25存储条件: 定期移植法

Penicillium│sp.分离基物: 人字木植物组织斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 药用植物内生菌培养基: CM0138生长条件: 28C存储条件: -80℃冰箱冻结

Myrothecium│roridum斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0014生长条件: 25-28℃

Saccharomyces│cerevisiae斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 酿造酱油。培养基: CM0077生长条件: 28-30℃存储条件: 真空冷冻干燥法；定期移植法

Fusarium│oxysporum分离基物: 根结线虫斜面培养物；冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 25℃存储条件: -80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法