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微生物菌种的培养:
⒈ 孢子制备
⑴ 孢子的制备
一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制备
霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。
⒉ 种子制备
⑴ 摇瓶种子制备
摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和*,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。
⑵ 种子罐种子制备
种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。
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产品名称 | 用途 | 货号 |
发酵乳杆菌 | 仅供科研 | GOY-01J6666
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菌种的培养:
1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。
4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。
5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。
保存方法:
传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙 [3] 。
液体石蜡覆盖保存法:该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
悬液保存法:
① 蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
② 糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。
载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。
常用的冷冻保存法:
① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是适用范围*的微生物保存法。
镉 AR,99.0%邻二氯苯标准溶液 0.099mg/ml,基体:异辛烷CR(Mouse Calretinin) ELISA Kit 小鼠钙结合蛋白
镉 CP,99.0%间二氯苯标准溶液 0.114mg/ml,基体:异辛烷HABP(Mouse Hya]uronate binding protein) ELISA Kit 小鼠透明质酸结合蛋白
镉 SP 分析标准品,99.3%CyPA(Mouse cyclophilin A) ELISA Kit 小鼠嗜环蛋白/亲环素A
镉 99.99% metals basis标准溶液 101µg/mLBMP-6(Mouse Bone morphogenetic protein 6) ELISA Kit 小鼠骨形成蛋白6
镉 ACS标准溶液 1.00mg/mL,基体:甲Mouse lymphocyte factor ELISA Kit 小鼠因子
钙黄绿素 AR二磷标准溶液 1.00mg/mlADH/VP/AVP(Mouse antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin) ELISA Kit 小鼠抗利尿/血管/精
结晶紫 ACS, ≥90.0%三标准溶液 1.00mg/mlAcSDKP(Mouse N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro) ELISA Kit 小鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯
无水氯化钙 99.99% metals basis1,1-二氯乙烯标准溶液 0.800mg/ml,基体:甲PA-IgG/M/A(Mouse plaet antibodies IgG/M/A) ELISA Kit 小鼠抗血小板抗体IgG/M/A
发酵乳杆菌马心肌红蛋白相对分子质量标准物质 马心肌红蛋白:16951信号通路WNT8A抗体
纯度标准物质 99.7%信号通路Wnt2抗体
无机元素混合溶液标准物质 Al、Ca、K、Na、Pb、Se:1.00μg/mL;As信号通路Wnt4抗体
无机元素混合溶液标准物质 Al、Ca、K、Na、Pb、Se:5.00μg/mL;As信号通路Wnt6抗体
无机元素混合溶液标准物质 Al、Ca、K、Na、Pb、Se:5.00μg/mL;AsWD重复膜蛋白61抗体
一砷溶液标准物质 0.335μmol/gWnt1信号通路蛋白3抗体
标准物质 99.9%湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征相关蛋白抗体
对酚标准溶液1.00mg/ml,体:WDR68蛋白抗体
萘标准溶液 51.7μg/mL,体:WDR91蛋白抗体
98%P53应答因蛋白5抗体
除草 分析标准品WD重复膜蛋白19抗体
除草 分析标准品,99.9%化WEE1蛋白抗体
镍标准溶液 100(20℃)μg/mL,体:1%HNO3糖类应答元件结合蛋白ChREBP抗体
硝根离子(NO5-)标准溶液1000μg/ml,溶剂:水肾母瘤蛋白抗体
硝根离子(NO6-)标准溶液100μg/ml,溶剂:水信号通路Wnt16抗体