《粮食及饲料中青霉酸等6种真菌毒素的同时测定》征求意见
- 2022/1/28 17:22:24 28484
- 来源：仪表网
【仪表网 仪表标准】由中国粮油学会立项的《粮食及饲料中青霉酸等6种真菌毒素的同时测定 液相色谱-质谱/质谱法》团体标准已完成征求意见稿，现公开征求意见。意见反馈邮箱liuxiaonan@ccoaonline.com，截止时间2022年2月22日前。
我国目前没有青霉酸、黄绿青霉素、霉酚酸、异烟棒曲霉素C的国家标准检测方法，但有赭曲霉毒素A和桔青霉素的国家标准检测方法。对于赭曲霉毒素A，目前相关的国家标准检测方法有超高效液相色谱法、胶体金快速定量法、LC-MS/MS法等。
《GB 5009.222-2016 食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定》中规定了两种方法测定桔青霉素残留，第一法为免疫亲和柱净化-高效液相色谱法(适用于大米、玉米、辣椒、红曲类产品中桔青霉素的测定)；第二法为C18固相萃取小柱净化-高效液相色谱法(适用于大米、大麦、燕麦、小麦中桔青霉素的测定)。此外，《DB32/T 1533-2009 饲料中桔青霉素的检测 酶联免疫吸附法》规定了饲料中桔青霉素的检测。
相关文献资料表明，单一种类真菌毒素的检测技术逐渐被多组分同时检测方法代替，已有许多文献报道了多种真菌毒素的同时检测方法，液相色谱-串联质谱法具有同时测定多种真菌毒素残留的潜力。LC-MS/MS也可同时测定开心果、小麦、花生、玉米、玉米片中的33种真菌毒素，在玉米中赭曲霉毒素A、青霉酸、桔青霉素的最低检出限分别为1.0、10、100 μg/kg，符合相关的限量标准要求。因此，LC-MS/MS同时检测多种真菌毒素已有相关的理论和技术支撑。
综上，虽然目前国家标准规定了赭曲霉毒素A和桔青霉素的检测方法，但未有青霉酸、霉酚酸、异烟棒曲霉素C、黄绿青霉素和赭曲霉毒素A、桔青霉素的同时检测方法，但文献资料显示采用液相色谱-串联质谱法同时测定多种真菌毒素残留具有可行性，因而本标准建立了这6种真菌毒素的同时检测方法。
本标准旨在建立高效确证的粮食及饲料中青霉酸、赭曲霉毒素A、桔青霉素、黄绿青霉素、霉酚酸、娄地青霉素C的同时检测方法，实施对粮食和饲料中真菌毒素的有效监管，保障粮食、饲料及其制品的安全性，为后续相关标准的制定、科研提供参考。
本标准按照GB/T1.1—2020给出的规则起草。本标准由中国粮油学会提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会(SAT/TC 270)归口。本标准主要起草单位：江南大学、苏州市食品检验检测中心、苏州市产品质量监督检验院。
本标准参考GB 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法；GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法；GB/T 27404 实验室质量控制规范 食品理化检测等文件编制而成。
本标准规定了粮食和饲料中青霉酸、赭曲霉毒素A、桔青霉素、黄绿青霉素、霉酚酸、异烟棒曲霉素C的残留检测原理、试剂及材料、仪器及设备、样品制备、样品测定、结果分析。本标准适用范围主要为粮食和饲料中青霉酸、赭曲霉毒素A、桔青霉素、黄绿青霉素、霉酚酸、异烟棒曲霉素C残留的检测。
方法原理：
采用乙腈-水-乙酸溶液提取试样中的真菌毒素，经涡旋或震荡、离心、取上清液经QuEchERS盐包、过柱、离心、稀释处理后，通过超高效液相色谱-串联质谱法测定，利用外标法定量。
仪器及设备：
除实验室常规仪器设备外，应注意下列仪器设备。1.超高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。2.天平：感量0.1mg和0.01g。3.粉碎机：电机转速≥1000 r/min。4.冷冻离心机：转速≥12000 r/min，可设4℃。5.涡旋混合器：转速≥100 r/min。6.振荡器：振荡频率≥50次/min。7.筛网：500 μm孔径试验筛。8.超声波清洗器。
待测溶液制备：
1.大米、玉米、小麦
准确称取2 g(精确到0.01 g)样品于50 mL离心管中，加入20 mL提取液，涡旋或震荡提取45 min，加入QuEchERS盐包，迅速用手震摇1 min，然后以10000 r/min离心10 min，取800 μL上清液过Qasis PRIME HLB小柱，弃去流出液800 μL，再取2 mL上清液过柱，接流出液1 mL于2 mL离心管中，在4℃下以12000 r/min离心10 min，取上清500 μL加入500 μL甲醇：水=1：9(V/V)，涡旋均匀，上机分析。
2.饲料
准确称取2 g(精确到0.01 g)样品于50 mL离心管中，加入20 mL提取液，涡旋或震荡提取45 min，加入QuEchERS盐包，迅速用手震摇1 min，然后以10000 r/min离心10 min，先取400 μL上清液过Qasis PRIME HLB小柱，弃去流出液400 μL，再取2 mL上清液过柱，取流出液1 mL于2 mL离心管中，在4℃下以12000 r/min离心10 min，取上清500 μL加入500 μL甲醇：水=1：9(V/V)，涡旋均匀，上机分析。
基质匹配标准曲线的绘制：
小麦、玉米、大米：按“6.3”处理基质空白样品，获得试样空白基质。分别取1、2、4、8、12、16、20 μL混合标准工作液(4.13.2)于2 mL进样瓶中，用空白基质稀释至1 mL，涡旋30 s，分别制得附录B.5所示浓度梯度系列基质匹配标准工作溶液，上机分析。
饲料：按“6.3”处理基饲料基质空白样品，获得试样空白基质。分别取1、2、4、8、12、16、20 μL混合标准工作液(4.13.3)于2 mL进样瓶中，用空白基质稀释至1 mL，涡旋30 s，分别制得附录B.6所示浓度梯度系列基质匹配标准工作溶液，上机分析。
定性测定：
按照色谱-质谱条件测定样品，如果检测的色谱峰保留时间与标准品色谱峰保留时间一致。允许偏差小于±2.5%；定性离子与定量离子的相对丰度与浓度相当的标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3规定，则可判断样品中存在被测物。
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