抗siPOOL回补序列（进一步的RNA干扰验证）

抗siPOOL回补序列(siPOOL-resistant rescue constructs)
用于进一步的基因敲低验证实验

为了进一步验证siPOOL产生的功能缺失表型是针对目标基因的，因此，我们将为您提供一个抗siPOOL的回补序列。当抗siPOOL回补序列在构建的质粒中表达时，靶基因的功能得到恢复，从而挽救或逆转目标基因功能缺失的表型。

图1. 抗siPOOL的回补序列设计。橙色表示目的基因上的siRNA识别位点。其中，突出显示编码序列（CDS）上的一个siRNA识别位点。举例：GTC密码子（编码Val氨基酸）与替代密码子如图所示，粗体显示了转录组中含量较高的替代密码子。

设计步骤：

1. 在siRNA识别位点选择替代密码子，改变mRNA序列，但不改变蛋白质。

2. 对所有CDS中siRNA识别位点的所有密码子进行替换，直到达到足够的错配。

3. 去除常见的限制性内切酶位点，添加侧翼序列，将抗siPOOL的CDS克隆到载体中。

客户数据：
案例1：siPOOL降低了激酶(X)的表达。抗siPOOL回补序列的表达恢复了激酶X的表达和功能，这表明了磷酸化底物X（p-底物X）的存在。

图2. 在siPOOL介导的敲低和回补实验前后，Western blot实验检测靶激酶X及其磷酸化底物（数据由未披露的客户提供）。


案例2：复合物的形成（通过荧光互相关光谱测量，FCCS）在一个携带标记物的siPOOL介导的敲减后减少。而通过表达抗siPOOL回补序列，能够恢复复合物的形成。

图3. 在siPOOL介导的敲减和回补实验中，通过FCCS测量两个荧光标记蛋白之间的复合物形成（数据由Intana Bioscience GmbH友情提供）。

抗siPOOL回补序列可以作为序列数据文件提供，或也可以克隆到标准/自定义结构中提供。欢迎联系我们详询抗siPOOL回补序列（进一步的RNA干扰验证）。