铜绿假单胞菌的产氨实验与氧化酶试验方法！

铜绿假单胞菌的产氨实验与氧化酶试验方法！

铜绿假单胞菌

⒈原理：铜绿假单胞菌产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，滴加纳氏试剂（dianhuagong），氨（NH4+）在碱性条件下与dianhuagong作用，生成红色的络合物。

⒉操作：将纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中，在36℃±1℃下培养20h～24h。然后向每支试管培养物加入1～2滴钠氏试剂，检查各试管的产氨情况，如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化，则为阳性结果，否则为阴性。

氧化酶

⒈原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使*氧化，再由氧化型*使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。

⒉操作：取2～3滴新鲜配制的氧化酶试剂滴到放于平皿里的洁净滤纸上。用铂金丝接种环或玻璃棒，将适量的纯种培养物涂布在预备好的滤纸上。在10秒内显深蓝紫色的视为阳性反应。也可以按照商品化氧化酶测试产品的说明书进行该项测试。

产荧光素实验（金氏B培养基）

⒈原理：蛋白胨提供氮源；磷酸盐促进荧光素的产生并抑制绿脓色素的产生；*为荧光素的产生提供必须的阳离子；琼脂使培养基的凝固。

⒉操作：将上述呈红褐色的且氧化酶反应呈阳性的培养物接种于金氏B培养基上，于36℃±1℃恒温箱培养24h～5d。每天需取出在紫外灯下检查其是否产生荧光，将5d内产生荧光的菌落记录为阳性。

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