$item.Name

首页>生命科学仪器>生物工程设备>细胞反应器

参考价:

1000  -  ¥5500/条
细胞的冻存方法与操作步骤及注意事项!

具体成交价以合同协议为准

2023-06-14北京市
型号
参数
品牌:其他品牌 保质期:5-20年 用途:分析,研究
该企业相似产品
本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。
产品简介
细胞的冻存方法与操作步骤及注意事项!微生物菌种查询网是集微生物菌种、ATCC菌种、细胞系、培养基为一体的大型微生物查询类网,欢迎前来购买!
详细信息

                    细胞冻存方法与操作步骤及注意事项



细胞冻存方法与操作步骤及注意事项


细胞越来越受广大科研者的喜爱,但细胞不像人们想象中那么强大,在培养复苏等过程中稍有不慎就不可能导致它的死亡。而且它必须是是在无污染的条件下培养,复苏才能保证实验效果。在此百欧博伟公司技术为您详细总结细胞的正确冷冻保存方法、保存详细步骤,相关注意事项如下:


一、保存方法(主要有两个):

(1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase*储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

(2)程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase*储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。


二、步骤:

(1)冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。

(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):将DMSO加入新鲜培养基中,*后浓度为5~10%,混合均匀,置于室温下待用。

(3)依细胞继代培养之操作,收集培养之细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。

(4)离心,去除上清液,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1~5×106cells/ml,混合均匀,分装于已标示*之冷冻保存管中,1ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。


三、注意事项:

(1)欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态,约为80–90%致密度。细胞冻存前应保证细胞的活力好,无污染

(2)冷冻前检测细胞是否仍保有其*性质,例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。

(3)一定要保证DMSO的浓度是10%,冻细胞要舍得用进口的DMSO

(4)注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级,无菌且无色(以0.22micron FGLP flon过滤或是直接购买无菌产品,如Sigma D-2650),以5~10ml小体积分装,4℃避光保存,勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级,以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用,因*储存后对细胞会有毒性。

(5)慢冻,快解冻。细胞在 -15 度左右胞内形成结晶对细胞损伤,缓慢降温有助于减少损伤,故放入 -20 度冰箱中冻存可实现缓慢降温较为方便,保存时间过久会影响细胞活力。


微生物菌种查询网拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在百欧博伟生物网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、*和稳定的合作关系!






相关技术文章

同类产品推荐

企业未开通此功能
详询客服 : 0571-87858618

产品参数

品牌 其他品牌
保质期 5-20年
用途 分析,研究
提示

仪表网采购电话