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ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。 但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。
引起ELISA测定错误结果的原因主要有:
①标本因素;
②试剂因素;
③操作因素。在实验过程中请严格按照使用说明操作,必能得出准确的实验结果,可提供免费技术咨询服务!
产品名称 | AP人抑肽酶ELISA试剂盒实验原理 |
英文名称 | Human Aprotinin, AP Elisa Kit |
货号 | FS-H63815 |
公司“质量是企业是生命之源”,选购优势如下:
1*抗体——、灵敏、特异
2操作——吸附均匀、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的优化方案——回收利用率高、可靠性强
4适用于体液、组织匀浆,细胞培养上清液、尿液等各种类型的样本。
5可检测指标齐全:生长因子、炎症因子、脂肪因子、基质金属蛋白酶等等
样本实验前准备:
ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
(1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
(4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
(5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
Psychrobacr│celer 速生嗜冷杆菌Psychrobacr│celer分离基物:沉积物/TVMC沉积物冻干物安全等级:1模式菌株:no有机物降解菌/可降解乙醛(已单菌验证)471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法 纯度:98%
Pseudoalromonas│arabiensis 阿拉伯海假交替单胞菌Pseudoalromonas│arabiensis分离基物:生物样/柳珊瑚冻干物模式菌株:no南大西洋细菌821生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法 纯度:98%
Amycolatopsis│magusensis 拟无枝菌菌(加词待译)Amycolatopsis│magusensis分离基物:沉积物/TVG沉积物斜面培养物模式菌株:no海洋放线菌,潜在的新种471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法 纯度:95%
Bacillus│oceanisediminis 海泥芽胞杆菌Bacillus│oceanisediminis分离基物:沉积物/TVG沉积物斜面培养物模式菌株:no海洋细菌471生长条件:30℃存储条件:液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法 纯度:95%
Aurantimonas│coralicida 杀珊瑚橙色单胞菌Aurantimonas│coralicida分离基物:沉积物/TVG沉积物斜面培养物安全等级:1模式菌株:no海洋细菌471生长条件:30℃存储条件:液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法 纯度:98+%
Microbacrium│profundi 深海微杆菌Microbacrium│profundi分离基物:沉积物/TVG表层沉积物冻干物模式菌株:no潜在的有机污染物降解菌/分离自十溴联醚富集菌群471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法 纯度:98+%
Pseudomonas│pelagia 海假单胞菌Pseudomonas│pelagia分离基物:沉积物/TVG沉积物斜面培养物模式菌株:no海洋细菌471生长条件:30℃存储条件:液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法 纯度:98%(HPLC)
Marinobacr│hydrocarbonoclasticus 除烃海杆菌Marinobacr│hydrocarbonoclasticus分离基物:沉积物/TVG沉积物斜面培养物安全等级:1模式菌株:no海洋细菌471生长条件:30℃存储条件:液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法 纯度:98%(HPLC)
AP人抑肽酶ELISA试剂盒实验原理MAP2 微管相关蛋白2抗体芳香烃受体抗体1,2-二溴-4,5-二甲苯Mouse CX37 (Connexin 37) ELISA Kit
Phospho-MAP2 (Ser136) 磷化微管相关蛋白2抗体吸引素抗体乙烯-醋乙烯共聚物Mouse CX40 (Connexin 40) ELISA Kit
Phospho-MAP2 (Thr1620/1623) 磷化微管相关蛋白2抗体腺苷三磷结合盒转运体A1抗体甲基烯苄基酯Mouse CX43 (Connexin 43) ELISA Kit
MAP1A 微管相关蛋白1A抗体蛋白激酶B2甲基烯苄基酯Mouse CNTN1 (Contactin 1) ELISA Kit
Talin 踝蛋白抗体血管生成素2抗体烯基磺Mouse CNTN2 (Contactin 2) ELISA Kit
Phospho-Talin (Ser425) 磷化踝蛋白抗体芳香化酶/色素P450/雌激素合成酶抗体烯基磺Mouse CNTN3 (Contactin 3) ELISA Kit
TBX2/T-box2 新型抑癌基因抗体腺苷A2A受体抗体烯基磺Mouse CORT (Corticosterone) ELISA Kit
TBX3 转录因子Tbx3抗体蛋白激酶A锚定蛋白95抗体4,4'-双[二(3,5-二甲苯基)氨基]-4''-苯基三苯胺Mouse SIRT1 (NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-1) ELISA Kit
操作流程:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准