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真菌种属鉴定 PCR Mix 5100 次运输产品及特点:
易错 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的*性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% (±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
真菌种属鉴定 PCR Mix 5100 次运输变性温度与时间:
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度,达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板,PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不*, DNA 双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热 DNA 聚合酶的活力, 高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间:退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物 不能与模板牢固结合.
真菌种属鉴定 PCR Mix 5100 次运输DNA 扩增效率下降;
温度低产量高,但过低可造成引物与模板 错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的 适退火温度,可根据引物的(G+C)%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 低 5℃,退火时间一般为 30~60 秒,足以使引物与模板之间*结 合,长时间退火没有必要。
真菌种属鉴定 PCR Mix 5100 次运输使用方法:
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次(见注) 72℃ 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
15(R),19(R)-hydroxy Prostaglandin F1α (100 ug) 9。alpha。,11。alpha。,15R,19R-tetrahydroxy-prost-13E-en-1-oic acid; 15(R),19(R)-hydroxy PGF1α; 15(R),19(R)-hydroxy Prostaglandin F1α
7-methyl Guanosine (50 mg) 7-
*(维生素H)(25GM) D-Biotin, 58-85-5; MW 244.31; Cell Culture Tested
Zoledronic Acid (hydrate) (50 mg) P,P’-[1-hydroxy-2-(1H-imidazol-1-yl)ethylidene]bis-phosphonic acid, monohydrate; Zoledronic Acid (hydrate)
8-methyl Nonanoic Acid (100 mg) 8-methyl Nonanoic Acid; Isocapric Acid; 8-methyl Nonanoic Acid
G3335; H-Trp-Glu-OH PPARγ Antagonist, G3335
FAAH (human recombinant) Assay Reagent (1 ea) FAAH (human recombinant); FAAH (human recombinant) Assay Reagent
*标记单甲基化组蛋白H3K27多肽 Biotinylated Monomethyl Histone H3K27 Peptide (100 ul)
DEPMPO-biotin (25 ug) N-[3-[[5-[(3aS,4S,6aR)-hexahydro-2-oxo-1H-thieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-1-oxopentyl]amino]propyl]-[(2S,3R)-2-(diethoxyphosphinyl)-3,4-dihydro-2-methyl-1-oxido-2H-pyrrol-3-yl]methyl ester-carbamic acid; DEPMPO-biotin
Benzydamine (1 mg) N,N-dimethyl-3-[[1-(phenylmethyl)-1H-indazol-3-yl]oxy]-1-propanamine
HA-1100 (hydrochloride) (25 mg) 5-[(hexahydro-1H-1,4-diazepin-1-yl)sulfonyl]-1(2H)-isoquinolinone, monohydrochloride; Hydroxyfasudil; HA-1100 (hydrochloride)
Arachidonic Acid-biotin (5 mg) Arachidonic Acid-biotin, 5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoyl-N’-biotinoyl-1,5-diaminopentane
384-Well Solid Plate (low volume; black) (5 ea) 384-Well Solid Plate (low volume; black)
BRD32048 (1 mg) N2-(4-metxoxypxenyl)-6-(1-piperidinylmetxyl)-1,3,5-triezine-2,4-diamine
yenine 5。5胺 [相当于Cy5。5胺] yenine 5。5 amine [equivalent to Cy5。5 amine]
Butaprost (free acid) (500 ug) 9-oxo-11。alpha。,16S-dixy7noxy-17-cyclobutyl-prost-13E-en-1-oic acid; 15-deoxy-16S-xy7noxy-17-cyclobutyl PGE1|(±)-15-deoxy-16S-xy7noxy-17-cyclobutyl PGE1; Butaprost (free acid)
Arachidonoyl Cyclopropylamide (10 mg) N-cyclopropyl-5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenamide; ACPA; Arachidonoyl Cyclopropylamide
4-(5H-Dibenzo[a,d]cyclohepten-5-ylidene)-1-[4-(2H-tetrazol-5-yl)butyl]-pipeni7ine AT 56
明胶磷酸盐缓冲液250g用于检测肉毒梭菌时样品稀释液
亚碲酸钠肉汤培养基基础 Sodium lurite Broth Base 用于*的增菌培养。每100ml培养基需另加入1%亚碲酸钠1ml
发酵蛋白胨 250
卵黄琼脂培养基250g/瓶用于梭菌的分离培养,每培养基中添加2支2incubationmedia卵黄琼脂培养基250g/瓶用于梭菌的分离培养,每培养基中添加2支21001
MethylRedVogesProskauerBroth
ISP培养基250g用于链霉菌的培养
BactoTM琼脂 优化有益的钙镁离子比例同时减少有害离子含量 454g incubation media BactoTM琼脂 优化有益的钙镁离子比例同时减少有害离子含量 454g
顶青霉 耐高温* 支/瓶
亚铋琼脂平板(9cm)用于沙门氏菌的选择性分离
WORT琼脂 250g 用于真菌,特别是酵母菌的计数和增菌培养
真菌种属鉴定 PCR Mix 5100 次运输BM液体培养基250g用于醋酸钙不动杆菌增菌培养
50023 BR 10 kg incubation media 50023 BR 10 kg
构巢裸胞壳 支/瓶
LBBroth(Lennox)
DTM添加剂2 1ml*5 每支添加于200ml DTM培养基中