PAGE 胶长加样枪头1盒实验详细介绍：

PAGE 胶长加样枪头1盒实验产品及特点:
尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是单独 配制各种溶液十分繁琐，为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点: 1. 一站式，含有电泳所需要的所有试剂，即开即用，十分方便，免去了 实验人员称取有毒物品。 2. 灵活，可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE，以便对长度各异 的 RNA 进行电泳。 3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交和放射自 显影等。 4. 使用新型缓冲液，可以防止甘油的干扰。
PAGE 胶长加样枪头1盒实验使用方法：
一、准备工作
1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿（详见该产品的使用手册）。
2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍，得到 1X 电泳缓 冲液待用。
3. 配制 10%过硫酸铵溶液 精确称取约 100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中，按每 1 mg 过硫酸铵加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，摇晃致溶， 立即使用。注意：放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积，一般配制一块 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液，配制一块 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的胶 需要 120 mL 凝胶溶液。
2. 新鲜的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液的配制：在装有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入约 130 mL 自备的去离子水，然后将全部甲叉双丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有 毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中）。充 分摇晃混匀后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
3. 根据所需要的凝胶溶液的体积，在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分
4. 搅拌并加热到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷却到室温后，将三角瓶接上真空系统抽真空处理 10-15 分钟以充分去 除溶液中的氧气（氧气会降低聚合反应效率）。但如果实验条件有限，此 步也可以省略。
6. 边摇晃溶液变加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%过硫酸铵。注意：即 使选择其他工作浓度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%过硫酸铵的用 量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化，TEMED 和 10%过硫酸铵的用量也要按比例改变。
7. 再充分摇晃约 30 秒后迅速灌胶，然后插入样品梳。
8. 室温放置 30-60 分钟使胶凝固。
9. 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的 1X 电泳缓冲 液。如果不马上使用，需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
10. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液，充分将每个加样空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。
PAGE 胶长加样枪头1盒实验后续处理：
1. 染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的 凝胶进行各种染色，包括银染（固定、漂洗、显影和定影等步骤）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天泽基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下观察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置，切胶后进行胶回收处理。
3. Northern 杂交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。
4. 放射自显影：如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的 玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保 鲜膜，真空抽干，然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。
人纤维环细胞HAFC

FSTL1 Others Mouse 小鼠 FSTL1 人细胞裂解液 (阳性对照)

大额牛与婆罗门牛杂交F1代皮肤成纤维样细胞;BOS-6

大鼠骨肉瘤细胞;UMR-106 肺腺癌细胞，LTEP-a-2细胞 MSCS细胞，猴的骨髓间充质干细胞

PANC-1, 人胰腺癌细胞 Human

IFNAR2 Others Human 人 IFNAR2 / IFNABR 人细胞裂解液 (阳性对照)
IL12B Others Mouse 小鼠 IL12B / IL-12B 人细胞裂解液 (阳性对照)

人脑瘤细胞;SF126

SD大鼠脂肪间质干细胞 SD rat adipose mesenchymal stem cells

BT-325细胞，人神经胶质瘤细胞 空肠弯曲菌 人胚皮肤成纤维细胞;CCC-ESF-1

SNU-5(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2

Hep G2(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0442SK-NEP-1(人肾母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2 人胚胎肌肉组织来源细胞;CCC-HSM-2
人脑瘤细胞;SF126

IL12B Others Mouse 小鼠 IL12B / IL-12B 人细胞裂解液 (阳性对照)

SD大鼠脂肪间质干细胞 SD rat adipose mesenchymal stem cells

BT-325细胞，人神经胶质瘤细胞 空肠弯曲菌 人胚皮肤成纤维细胞;CCC-ESF-1

SNU-5(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2

Hep G2(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0442SK-NEP-1(人肾母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2 人胚胎肌肉组织来源细胞;CCC-HSM-2
Anti-GRGDS/FITC 荧光素标记抗粘附多肽抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-wtp53/FITC 荧光素标记野生型p53单克隆抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh beta COP β衣被蛋白抗体 规格 0.2ml

AEG-1 peptide AEG-1抗原 0.5mg

HFM1 英文名称： SEC63域内含蛋白1抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh RanBP7/Importin 7 RAN结合蛋白7抗体 规格 0.2ml

Anti-wtp53/FITC 荧光素标记野生型p53单克隆抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
Goat Anti-human IgG/Cy7 Cy7标记的羊抗人IgG 0.1ml

G protein alpha inhibitor 1 英文名称： G蛋白α抑制剂抗体 0.2ml

脑源神经营养因子/脑衍化神经营养因子 Anti-BDNF 0.1ml

Anti-NIK/FITC 荧光素标记NFkB诱导的激酶抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PPP2R1A 蛋白质磷酸酶2调节亚基1A抗体 规格 0.2ml

Anti-WRCH-1/FITC 荧光素标记WRCH1抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
PAGE 胶长加样枪头1盒实验NADPH peptide 还原型辅酶Ⅱ抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-AQP5 水通道蛋白-5抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ATG4D(Ser15) 磷酸化自噬相关蛋白4D抗体 规格 0.1ml

兔抗山羊 IgG(H+L)/HRP 0.1ml 美国Jackson公司分装

SKA1 英文名称： 纺锤体和着丝粒相关蛋白1抗体 0.1ml

MREG 英文名称： MREG蛋白抗体 0.2ml

Anti-AQP5 水通道蛋白-5抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml