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小鼠ELISA试剂盒骨髓嗜多细胞微核的测定方法

来源: 上海酶联生物耗材有限公司

2015/1/21 20:58:50 497

目前国内外已把微核测试用于辐射损伤、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。

   嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段,此时红细胞的主核已排出,因胞质内含有核糖体,Giemsa染色呈灰蓝色,成熟红细胞的核糖体已消失,被染成淡橘红色。骨髓中嗜多染红细胞数量充足,由于无核,极易观察到微核,因此,骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的细胞群。

实验对象

   成年健康小鼠,体重25g左右,雌雄均可。

实验试剂与器材

1)器材:显微镜、低速离心机、电子天平、解剖器械(搪瓷解剖盘、探针、剪刀、镊子)、注射器、试管、试管架、磨口试剂瓶、滴管、染色缸、洗耳球、量筒、清洁载玻片。

2)试剂:0.9%生理盐水、灭活的小牛血清、*、甲醇、PBS (pH6.8)Giemsa染液、瑞氏染液。

4. 实验方法与步骤

1)*处理:取骨髓前24h先给小鼠腹腔注入*,注射剂量为100mgkg动物体重。

2)取骨髓:用损伤脊髓法处死小鼠,然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉,取出大腿骨,用一小块纱布来回搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头,然后用注射器吸取5ml生理盐水,插入股骨一端,将骨髓细胞冲洗至10ml的离心管中。可重复冲洗多次,直至骨髓腔呈白色为止。

3)离心处理:将所获得的细胞悬浮液以 1000rpm离心10min,吸去上清液,在沉淀物中加入2滴灭活的小牛血清,制成细胞悬液。

4)涂片:滴一滴悬液于载玻片一端,按常规方法涂片,在空气中晾干。

5)固定:将晾干的载玻片放入甲醇固定液中10min,取出晾干。

6)染色:将制片平放在玻璃板上,用1910 GiemsaPBS∶瑞氏染液,染色15min,流水冲洗后晾干即可镜检。

7)观察:嗜多染红细胞为年幼红细胞,呈灰蓝色,略大于红细胞(红色),微核多呈圆形和椭圆形,呈蓝紫色或紫红色(图13-3)。

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